牛腺病毒5型探针法qPCR试剂盒（不含内参） Bovine Adenovirus 5 Probe qPCR Kit

产品及特点

牛 腺 病 毒 5 型 （Bovine  Adenovirus   5  ，  BAV-5 ） 是 牛 腺 病 毒 的 一 种  ， 牛 腺病 毒 属 于 腺 病 毒 科 哺 乳 动 物 腺 病 毒 属 ， 为 无 囊 膜 的 线 性 双 链 DNA 病 毒 ， 全 长 约 为35 kb。 牛 腺 病 毒 5 型 感 染 能 够 引 起 牛 呼 吸 困 难 、 鼻 和 眼 分 泌 物 增 加 等 呼 吸 道 临 床 症状  ， 另外表现为发热 、 轻度腹泻等症状  ， 组织学上表现为增生和坏死性细支气管炎 、 肺 膨胀不全 等 ，  严重威 胁着犊牛健 康 ，  对养殖 业带来一定 的经济损 失 ，  因此快速 检 测 牛 腺 病 毒 5 型 具 有 重 要 意 义 。 本 产 品 是 以 探 针 法 荧 光 定 量 PCR 技 术 为 基 础 开发 的专 门检 测牛 腺 病毒 5 型 的试 剂盒 ，  它 具有 下列 特点 ：

1.  即开即用 ，  用户只需要提供样品 DNA 模板 。

2.  引物和探针经过优化 ，  分析灵敏度高 ，  可以达到100 拷贝/反应 。

3.  提供阳性对照 ，  便于区分假阴性结果 。

4.  特 异 性 高 ， 引 物 是 根 据 牛 腺 病 毒 5 型 DNA 高 度 保 守 区 设 计 ， 不 会 跟 其 他 生 物 的DNA发 生 交 叉 反 应 。

5.  既 可 用 于 定 性 检 测 ， 又 可 用 于 定 量 检 测 。 定 量 检 测 时 线 性 范 围 至 少 为 5 个 数 量级。

6.  本 产品 足够 50 次20 μ L 体 系的 探针 法荧 光 定量 q PCR 反 应 。

7.  本产品只能用于科研 。

规格及成分

试剂盒组成

注意  ： 引物-探针干粉在使用前需要短暂离心  ， 然后在离心管中加入165uL的超纯水充分混匀后再使用   ， 未用完的需要-20℃保存。

运输及保存

低温运输 ， -20℃保存 ，保存期限为12个月。

自备试剂

样品DNA ， 核酸纯化试剂盒

使用方法

一、 稀释标准曲线样品 （以1E 1-1E 6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）  。

由于标准品浓度非常高  ，  因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行  ， 千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分  。 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原  ， 本产品不提供活体样品做阳性对照  ， 只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管  ，分别为6  ， 5  ，4  ， 3  ，2  ，  1。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液  ，最好用带芯枪头  ，下同 。

3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供) ，充分震荡1分钟 ，得1E6拷贝/μ L的标准曲线样品 。放冰上待用。

4. 换枪头 ，在5号管中加入5 μL  1 E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得) ，充分震荡1分钟，得1E 5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头 ，在4号管中加入5 μL  1 E 5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得) ，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品 。放冰上待用。

二 、 样品DNA的制备

7. 如果有N个样品  ， 最好设置N+2个提取  ， 多出的一个是PC （样品制备阳性对照） ，一个是NC （样品制备阴性对照） 。 可以用10μL第6步所得4号稀释液再加上一定量的水使 总 体 积 跟 每 次 样 本 制 备 所 要 求 的 起 始 样 本 体 积 一 样 ， 以 此 作 为PC  。 另 外 用 水 作 为NC。

8.  用自选方法纯化样品的DNA ， 本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容 。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三 、 Probe qPCR反应 （20μL体系  ， 在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重复 ， 则标记N+9个PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2个样品 ， 1个用于PCR阴性对照 （用水做模板）  ， 6个用于标准曲线  。 如果做定性分析并且只做1次重复 ， 则标记N+4个PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2个样品 ， 1个用于PCR阴性对照 （用水做模板） ， 1个用于PCR阳性对照 （直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板） 。 下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.  在标记管中按下表加入各成分 （本表只列出一次重复 。 样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照 ， 并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加） :

成分

样品管N+2个

PCR阴 性对照

标准曲线样品管

（1-6管）

2 × Probe  qPCR  Master Mix

10μL

10μL

各10μL