人疱疹病毒6型探针法qPCR试剂盒 Human HerpesvirusType 6 Probe qPCR Kit

产品及特点

人疱疹病毒 6 型 （ Human  Herpesvirus-6 ， HHV-6 ） 属疱疹病 毒科β亚科 ，为 1986 年 从 淋 巴 增 生 性 疾 病 和 艾 滋 病 患 者 淋 巴 细 胞 中 培 养 获 得 的 一 种 新 病 毒 。 HHV-6 病 毒 颗 粒 呈 球 形 ， 有 包 膜 ， 平 均 直 径 约 为150 纳 米 ， 基 因 组 为 线 状 双 链DNA 。 其 基 因 结 构 和 抗 原 性 与 其 他 已 知 的 5 种 疱 疹 病 毒 不 同 。 HHV-6 为 嗜 淋 巴 细胞 病 毒 ， 可 在 T 型 及 B 型 淋 巴 细 胞 内 复 制 。 根 据 抗 原 性 不 同 ， 又 可 将 HHV-6 分 为A  、 B 两 组 。 HHV-6 与 人 巨 细 胞 病 毒 (HC MV  / HHV-5)宿 主 相 似 ， 主 要 感 染CD4 +T 细 胞 、 CD8 +T 细 胞 、 单 核 巨 噬 细 胞 和 NK 细 胞 ， 亦 可 在 唾 液 腺 、 乳 腺 、 肾脏中潜伏并持续进行低密度复制 。 病毒在淋巴细胞内复制时可产生明显的细胞病变 ， 并 最 终 导 致 宿 主 细 胞 破 裂 、 溶 解 。 HHV-6 可 通 过 唾 液 飞 沫 及 密 切 接 触 、 输 血或器官移植传播 。 除免疫低下外 ， 绝大多数 人感染后终身都不会产生明 显症状 ； 免疫低下者 ， 潜伏 的病毒可被激活并产生急性 感染症状 ， 此时会出现间质 性肺炎 、 脑炎 、 脑膜炎 、 肝炎及多器官衰竭等症状 ， 活化的病毒可大规模感染T淋巴细胞 ， 使免疫功能进一步削弱 ， 最后对人体健康产生较大影响 ， 因此人疱疹病毒6型的快速准 确鉴 定 对 该病 的 预 防和 治 疗 有着 重 要 作用 ， 为 此本 公 司 开发 了 简 单快 捷 的 HHV - 6探针法荧光定量PCR检测试剂盒 ， 它具有下列特点 ：

1.  即开即用 ， 用户只需要提供样品DNA 模板。

2.  引物和探针经过优化 ， 分析灵敏度高 ， 可以达到100 拷贝/反应。

3. 提供阳性对照 ， 便于区分假阴性结果。

4.  特 异 性 高 ， 引 物 是 根 据 人 疱 疹 病 毒 6 型 DNA 高 度 保 守 区 设 计 ， 不 会 跟 其 它 的DNA发生交叉反应 。

5.  既 可 用 于 定 性 检 测 ， 又 可 用 于 定 量 检 测 。 定 量 检 测 时 线 性 范 围 至 少 为 5 个 数 量级。

6. 本产品足够50 次20μL体系的探针法荧光定量q PCR 反应。

7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

试剂盒组成

成分

规格

2 × Probe qPCR MasterMix

0.5 mL

荧光PCR专用模板稀释液

1 mL

超纯水

1 mL

人疱疹病毒6型qPCR引物-探针干粉

50次

人疱疹病毒6型PCR阳性对照(1E 7拷贝/μL)

50μL

注意： 引物-探针干粉在使用前需要短暂离心 ，然后在离心管中加入 165 μL 的超纯水充分混匀后再使用 ，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存

低温运输 ， -20℃保存 ，保存期限为24个月。

自备试剂

样品 DNA

使用方法

一、稀释标准曲线样品（以1E 1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例） 。

由于标准品浓度非常高 ， 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行 ， 千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分 。 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原 ， 本产品不提供活体样品做阳性对照 ，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管 ，分别为6 ， 5 ，4 ， 3 ，2 ， 1。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液 ，最好用带芯枪头 ，下同 。

3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供) ，充分震荡1分钟 ，得1E6拷贝/μ L的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头 ，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得) ，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头 ，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得) ，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品 。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7. 如果有  N 个样品 ， 最好 设置  N+2 个提取 ， 多出 的一个是  PC （样品制备阳 性对照） ，一个是 NC（样品制备阴性对照） 。可以用 10 μL 上步所得第 4 号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样 ， 以此作为 PC 。另外用水作为 NC。

8. 用自选方法纯化样品的DNA ， 本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、 Probe qPCR反应（20μL体系 ，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重复 ， 则标记N+9个PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2个样品 ， 1个用于PCR阴性对照 （用水做模板） ， 6个用于标准曲线 。 如果做定性分析并且只做1次重复 ， 则标记N+4个PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2个样品 ， 1个用于PCR阴性对照（用水做模板） ， 1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号