重组小鼠DNMT1蛋白(DNA甲基转移酶1)是通过基因工程技术表达纯化的活性蛋白,属于DNA甲基转移酶家族,可特异性催化DNA甲基化修饰,结构稳定、活性可控,广泛应用于基础科研、表观遗传机制分析、蛋白互作探究及分子调控研究等场景,能满足各类科研实验的精准需求。
一、基本信息
该蛋白对应小鼠Dnmt1基因(Entrez Gene ID: 13439),UniProt编号Q61472,编码全长约1616个氨基酸,理论分子量约183.5 kDa;若带有N端His标签,分子量约为186-187 kDa,可通过SDS-PAGE清晰检测识别。
表达系统主流采用大肠杆菌(E. coli),部分产品可选用HEK293哺乳动物细胞表达,无动物源成分,能 程度保留蛋白天然构象与生物活性。常见融合标签为N端His标签,部分产品可提供无标签版本,标签设计便于后续亲和纯化及实验操作,可根据科研需求选择保留或切除。
该蛋白基因别名包括DNA MTase 1、MTase I,其氨基酸序列高度保守,含催化结构域、调节结构域及DNA结合结构域,是科研实验中常用的标准蛋白,可参与表观遗传相关生理过程调控。
二、质量参数
纯度经亲和层析、凝胶过滤等多步纯化工艺处理,通过SDS-PAGE银染或考马斯亮蓝染色检测,纯度≥95%,无明显杂带,能有效避免杂蛋白对实验结果的干扰。
生物活性稳定,可通过其DNA甲基转移酶活性检测,比活性通常为15-30 pmol/min/μg,结合常数(Kd)通常为0.6-2.4 μM,能满足功能学实验的严格要求,保障实验结果的可靠性。
产品状态分为冻干粉末和无菌过滤液体两种,冻干品无防腐剂,液体品多为无色透明状,内毒素含量<1.0 EU/μg,符合细胞实验及蛋白功能研究的标准。
三、配方与保存
冻干品通常由0.2μm过滤的PBS缓冲液(含EDTA、DTT)冻干制备,部分产品添加BSA作为载体蛋白;液体品缓冲体系多为20 mM Tris-HCl(pH 8.0),含0.15 M NaCl、50%甘油、1 mM DTT及2 mM EDTA,可有效维持蛋白稳定性,防止蛋白变性。
运输条件根据产品状态调整,冻干品可常温运输,液体品需4℃冷藏运输,全程避免温度波动。储存时,冻干品在-20℃至-70℃条件下可稳定保存12个月;液体品收到后需立即分装,-80℃长期保存可稳定1年,4℃短期存放可维持1-2周,严禁反复冻融,建议按单次使用量分装,减少蛋白活性损失。
冻干品复溶时,建议用无菌PBS(含至少0.1%人血清白蛋白或牛血清白蛋白)溶解,复溶浓度建议为250 μg/mL,复溶后需4℃冷藏,3个月内用完,避免反复冻融导致活性下降。
四、核心功能与应用
DNMT1蛋白含保守的催化结构域与DNA结合结构域,可特异性识别并结合DNA序列,催化S-腺苷甲硫氨酸的甲基转移至DNA胞嘧啶残基,参与DNA甲基化维持、基因表达沉默、染色质稳定及细胞分化调控等生理过程,是表观遗传调控中的关键分子。
在科研应用中,可用于基础机制研究,探究其在DNA甲基化、表观遗传调控及细胞分化中的作用;可作为标准蛋白用于蛋白互作实验,筛选与DNMT1结合的蛋白及DNA序列,构建表观遗传调控网络;还可用于SDS-PAGE、质谱分析等实验,作为蛋白分子量标准及活性验证对照,同时可用于相关检测方法的建立与优化。
五、使用注意事项
实验前需短暂离心,避免蛋白黏附管壁造成损失;稀释时需使用配套缓冲液,严格控制稀释比例,防止蛋白聚集失活。操作过程中需保持无菌环境,避免外源污染影响实验结果。该产品仅用于科研用途,需严格按照实验规范操作,妥善储存与处理。