重组人PTEN蛋白是通过基因工程技术制备的人源全长蛋白,其氨基酸序列覆盖1至403位,对应UniProt访问号P60484,是一种具有双重特异性磷酸酶活性的多肽分子,广泛应用于各类基础研究实验中,具有较高的研究价值。
该蛋白通常采用大肠杆菌作为表达系统进行制备,N端带有His标签,便于后续的分离纯化操作。经SDS-PAGE检测,其纯度可达85%以上,部分产品纯度可达到90%,能满足不同实验对蛋白纯度的要求。其预测分子量约为47至49 kDa,不同制备工艺下观测分子量可能略有差异,常见范围在46.8 kDa至49.3 kDa之间。
在分子结构上,重组人PTEN蛋白包含磷酸酶结构域和C2结构域,其中C2结构域可引导蛋白定位于细胞膜,这是其发挥功能的重要结构基础。该蛋白无糖基化修饰,其氨基酸序列高度保守,其中W274是关键氨基酸残基,对其分泌过程具有重要影响。
该蛋白的核心功能是通过去磷酸化作用,主要作用于磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸,将其转化为磷脂酰肌醇(4,5)-二磷酸,从而负向调控相关细胞信号通路,参与细胞周期进程、凋亡、迁移等多种细胞生理过程的调节。此外,它还能与多种蛋白相互作用,如p53、TMED10等,进一步调控其自身活性及细胞内相关反应。
在应用场景方面,重组人PTEN蛋白可用于SDS-PAGE、Western Blot(WB)、功能学检测等实验,能与相关试剂发生特异性反应,为研究其分子功能、相互作用机制提供有力支持。部分产品经活性检测,其比活性可达100 pmol/min/μg(在37℃条件下通过PtdIns(3,4,5)P3水解检测),可满足功能学实验的需求。
该蛋白的产品形式主要有冻干粉和液体两种。冻干粉通常由含5%海藻糖、5%甘露醇或其他保护剂的PBS溶液冻干制成,液体形式则多溶于含甘油、氯化钠、Tris-HCl等成分的缓冲液中,不含动物源成分和载体蛋白,保证了实验的准确性和安全性。
储存与运输方面,该蛋白对储存条件有明确要求,运输时通常采用蓝冰冷藏,避免高温环境。短期储存可置于-80℃,长期储存建议分装后置于-80℃,避免反复冻融,否则会导致蛋白活性下降。冻干粉在-20℃至-80℃条件下可稳定保存12个月,复溶后的蛋白溶液在4℃至8℃可保存2至7天,分装后在-20℃以下可保存3个月。
复溶时需注意,冻干粉使用前应先离心,将管壁或管盖的粉末收集至管底,再加入无菌水或相应缓冲液,轻轻吹吸2-3次使其溶解,避免使用涡旋振荡器,防止破坏蛋白空间结构。复溶后建议调整蛋白浓度至0.1-1 mg/ml,便于后续实验使用。