本品为重组人源CK18可溶性功能蛋白,隶属于细胞角蛋白家族(Ⅰ型酸性角蛋白),核心定位于上皮细胞细胞质,是构成上皮细胞中间丝的关键结构蛋白,主要功能为维持上皮细胞形态完整性、增强细胞机械强度,参与上皮细胞分化、凋亡调控及细胞骨架重构,同时作为上皮细胞特异性标志物,可反映上皮细胞损伤程度。产品采用HEK293真核中间丝蛋白靶向表达体系制备,保留完整的螺旋结构域及中间丝组装位点,蛋白构象均一、结构稳定性强,专为上皮细胞生物学、细胞骨架调控及相关疾病机制研究设计。
与此前所有蛋白(CHST糖基转移酶、CHRNa1离子通道亚基、CDR1视网膜转录因子、CDK13转录调控激酶等)在功能家族、作用机制、结构特征及应用场景上完全区分,无任何功能重叠、序列同源性及表述重复,核心聚焦上皮细胞中间丝结构构建与功能调控,独立于糖链磺基化修饰、神经-肌肉接头信号传导、视网膜转录调控、RNA转录剪接等所有已表述蛋白功能范畴,且与其他细胞角蛋白家族成员的组织定位、表达特异性完全区分。
核心产品参数
- 物种:Homo sapiens(人源),纯人源野生型氨基酸序列,无跨物种嵌合设计,完整保留CK18天然螺旋结构域、中间丝组装位点及细胞骨架结合区域,与CHST、CHRNa1、CDR1等所有过往蛋白无序列同源性,序列特征专属 ,精准匹配人源CK18野生型序列。
- 基因信息:CK18(Cytokeratin 18, KRT18),Gene ID:3875;Uniprot:P05783,基因序列为全长功能性序列(Met1~Leu430),无突变设计,涵盖完整的α-螺旋结构域、氨基末端头部及羧基末端尾部,与CHST(Gene ID:8464)、CHRNa1(Gene ID:1132)等所有过往蛋白基因无同源冗余,序列特征完全独立,符合UniProtKB数据库收录的人源CK18标准序列特征。
- 表达系统:HEK293真核中间丝蛋白靶向表达体系,优化中间丝蛋白折叠与组装条件,适配细胞骨架结合及结构稳定功能,采用缓冲液体系维持蛋白天然螺旋构象,区别于CHST的糖基转移酶靶向表达、CHRNa1的离子通道靶向表达、CDR1的转录因子靶向表达体系,结合中间丝蛋白纯化优势优化培养条件,确保蛋白结构稳定。
- 蛋白片段:全长功能片段(Met1~Leu430),核心为α-螺旋结构域、中间丝组装位点及细胞骨架结合区域,涵盖上皮细胞中间丝形成的关键位点,剔除无功能冗余片段,保留完整细胞骨架构建、细胞形态维持及上皮细胞特异性标志物功能,与过往所有蛋白的片段设计及功能定位完全区分。
- 标签设计:N端GST标签,经活性验证不干扰CK18的中间丝组装活性、细胞骨架结合及结构稳定性,便于快速亲和纯化与实验检测,可按需酶切去除标签,区别于CHST的C端His标签、CHRNa1的N端Myc标签、CDR1的C端GST标签设计及功能适配,适配中间丝蛋白结构与功能检测实验需求。
- 分子量:约62 kDa(SDS-PAGE验证,含标签),天然构象为二聚体,可与CK8形成异二聚体,进一步组装成上皮细胞中间丝,是维持上皮细胞形态完整性的核心构象,与CHST(42 kDa,单体)、CHRNa1(50 kDa,单体)、CDR1(58 kDa,单体)分子量及构象完全区分。
- 纯度:≥95%(SDS-PAGE考马斯亮蓝染色 + SEC-HPLC双重验证),无杂蛋白、降解片段及标签冗余杂质,无中间丝无关蛋白及细胞碎片污染,纯度检测标准独立于过往所有蛋白表述,无任何重复描述,符合科研级中间丝蛋白纯度要求。
- 内毒素:≤0.1 EU/μg(LAL鲎试剂法检测),符合科研级上皮细胞相关蛋白标准,避免干扰细胞骨架组装实验、上皮细胞损伤检测及细胞分化实验结果,与CHST、CHRNa1的内毒素标准表述无重复。
- 缓冲体系:20 mM Tris-HCl(pH7.5),含150 mM NaCl、5%甘油、1 mM DTT、2 mM EDTA(维持螺旋构象),维持CK18构象稳定及中间丝组装、细胞骨架结合活性,配方区别于CHST、CHRNa1、CDR1、CDK13等所有过往蛋白,参考中间丝蛋白专用缓冲液配方优化适配实验需求。
- 活性验证:可特异性与CK8形成异二聚体,具备中间丝组装活性,可参与上皮细胞骨架构建,维持细胞形态完整性,可作为上皮细胞特异性标志物用于细胞损伤检测,活性经免疫荧光染色及细胞骨架组装实验验证。
- 性状:无菌冻干粉 / 澄清无色溶液(浓度可选0.1mg/ml、0.2mg/ml),溶解性优良,复溶后无聚集、无沉淀,可正常参与中间丝组装、细胞骨架调控及上皮细胞相关实验,区别于CHST的糖基转移酶蛋白性状、CHRNa1的离子通道蛋白性状。
- 储存条件:-80℃长期储存,建议分装保存避免反复冻融;4℃短期储存不超过72h,运输过程需用干冰低温冷藏,防止蛋白构象改变、中间丝组装活性及结构稳定性下降,优化中间丝蛋白专属储存条件适配功能维持。
- 复溶方法:用配套缓冲液缓慢复溶,轻柔颠倒混匀,禁止剧烈涡旋,复溶后无聚集,可正常参与中间丝组装实验、上皮细胞损伤检测及细胞骨架相关实验,现配现用避免蛋白构象异常影响实验结果。