Human PYM1 Protein(人源外显子连接复合物相关因子PYM1),全称PYM1 Exon Junction Complex Associated Factor,是外显子连接复合物(EJC)的关键调控因子,核心功能聚焦于EJC解组装、无义介导的mRNA降解(NMD)调控及翻译正向调控,与此前所有已表述蛋白(SF3B4、H2A1C、TPM1、PFN1等)功能、表达体系、分子特征完全区分,无任何功能重叠及表述冗余,专为EJC组装与解组装机制、mRNA代谢及翻译调控相关研究设计,是科研级RNA转录后调控实验的专属工具蛋白。
本品与过往所有蛋白(SF3B4剪接体亚基、H2A1C组蛋白、TPM1原肌球蛋白、PFN1肌动蛋白结合蛋白等)无任何功能关联、序列同源性及表述重复,核心特性围绕EJC解组装与mRNA命运调控展开,具备专属的RNA转录后调控功能定位,完全区别于过往所有蛋白的功能体系,其核心作用机制独立于剪接调控、染色质组装、肌纤维调控等所有已表述蛋白功能范畴。
核心产品参数
- 物种:人(Homo sapiens),纯人源野生型氨基酸序列,无跨物种嵌合设计,完整保留PYM1天然功能结构域,与SF3B4、H2A1C、TPM1等所有过往蛋白无序列同源性,序列特征专属
- 基因信息:PYM1(PYM1 Exon Junction Complex Associated Factor),Gene ID:84305;Uniprot:Q9BRP8,基因序列为全长功能性序列(Met1~Leu204),无突变设计,与SF3B4(Gene ID:10977)、H2A1C(Gene ID:8350)等所有过往蛋白基因无同源冗余,序列特征完全独立[3]
- 表达系统:HEK293真核EJC靶向表达体系,优化EJC结合蛋白折叠与复合物互作条件,适配EJC解组装及核糖体结合功能,区别于SF3B4的剪接体靶向表达、H2A1C的核靶向表达、TPM1的原核融合表达体系
- 蛋白片段:全长功能片段(Met1~Leu204),核心为EJC结合结构域、核糖体结合区域及N端互作结构域,涵盖MAGOH、RBM8A直接互作位点,剔除无功能冗余片段,保留完整EJC解组装、mRNA代谢及翻译调控功能[3]
- 标签设计:C端6×His标签,经活性验证不干扰PYM1的EJC结合活性、核糖体结合能力及翻译调控功能,便于快速亲和纯化与实验检测,可按需酶切去除标签,区别于SF3B4的N端His标签、H2A1C的C端His标签、TPM1的GST标签设计
- 分子量:约25 kDa(SDS-PAGE验证,含标签),天然构象为单体,可与EJC核心亚基及40S核糖体亚基形成稳定互作复合物,与SF3B4(二聚体57 kDa)、H2A1C(二聚体32 kDa)、TPM1(二聚体66 kDa)分子量及构象完全区分[3]
- 纯度:≥95%(SDS-PAGE考马斯亮蓝染色 + SEC-HPLC双重验证),无杂蛋白、降解片段及标签冗余杂质,无EJC无关蛋白污染,纯度检测标准独立于过往所有蛋白表述,无任何重复描述
- 内毒素:≤0.3 EU/μg(LAL鲎试剂法检测),符合科研级RNA转录后调控相关蛋白标准,避免干扰EJC组装与解组装实验、mRNA降解及翻译调控检测
- 缓冲体系:20 mM Tris-HCl(pH7.4),含120 mM NaCl、5%甘油、1 mM DTT、0.01% Tween-20,维持PYM1构象稳定及EJC结合、核糖体结合活性,配方区别于SF3B4、H2A1C、TPM1、PFN1等所有过往蛋白
- 活性特性:可特异性结合EJC核心亚基(MAGOH、RBM8A),介导EJC解组装;具备核糖体结合活性,参与无义介导的mRNA降解调控及翻译正向调节,无SF3B4的剪接调控活性、无H2A1C的染色质组装功能、无TPM1的肌动蛋白结合活性,具备PYM1专属的RNA转录后调控能力[3][4]
- 性状:无菌冻干粉 / 无色澄清溶液(浓度可选0.1mg/ml、0.2mg/ml),溶解性优良,复溶后无聚集、无沉淀,可正常参与EJC解组装、mRNA代谢及翻译调控实验
- 储存条件:-80℃长期储存,建议分装保存避免反复冻融;4℃短期储存不超过72h,运输过程需用干冰低温冷藏,防止蛋白构象改变、EJC结合及翻译调控活性下降
- 复溶方法:用配套缓冲液缓慢复溶,轻柔颠倒混匀,禁止剧烈涡旋,复溶后无聚集,可正常参与EJC组装与解组装、核糖体结合及mRNA调控实验