一、靶标背景
APAF1(Apoptotic Protease Activating Factor 1)是胞质内的关键调控蛋白,分子量约 130-141 kDa。其结构含 N 端 CARD 结构域、中央 CED-4 同源区及 C 端 WD-40 重复序列。静息状态下呈单体自抑制构象;受信号触发后,结合细胞色素 c 与 ATP/dATP,构象改变并寡聚化,形成七聚体 “凋亡小体” 复合物,介导下游级联反应,是维持细胞稳态与个体发育的核心分子。该蛋白广泛表达,脑、心、肺与脾脏中水平较高。
二、抗体基本信息
类型:多为兔 / 鼠源多克隆或单克隆 IgG,经抗原肽或重组蛋白免疫制备。
免疫原:常用人 APAF1 N 端肽段(如 aa1-50、aa12-28)或全长重组蛋白。
特异性:识别内源性全长 APAF1,部分可识别人、小鼠、大鼠等多物种同源蛋白。
三、核心应用
Western Blot (WB):检测细胞 / 组织裂解液中 APAF1 表达量,条带约 130 kDa。
免疫荧光(IF)/ 免疫细胞化学(ICC):定位胞质内 APAF1,观察其分布与聚集。
免疫组化(IHC):分析石蜡 / 冰冻组织切片中 APAF1 的表达定位。
免疫沉淀(IP):富集 APAF1 并研究其与细胞色素 c、Caspase-9 等分子的相互作用。
其他:可用于 ELISA、流式细胞术(FCM)及电镜观察。
四、使用与保存
稀释比例:WB 常用 1:1000–1:3000;IHC/IF 为 1:50–1:500,需实验优化。
保存:液体形态,含 0.02% 叠氮钠防腐剂;长期 - 20℃或 - 80℃分装保存,避免反复冻融。