猴痘病毒探针法 qPCR 试剂盒 Monkeypox Virus West African Strain Probe PCR Kit

产品及特点

猴痘病毒 （ Monkeypox Virus） 属正痘病毒属 ， 可在非洲绿猴肾细胞中培养生长 ， 导致细胞病变 。 人类感染猴痘 ， 主要通过被已感染的动物咬伤 ，或直接接触被感染动物的血液 、 体液 、 猴痘病损而受染； 通常由动物传给人 ， 偶也可以发生人到人的猴痘传播 。 一般认为是在直接的 、 长时间面对面的接触中 ， 通过含毒的大量呼吸飞沫而传播 。 猴痘还可以通过直接接触感染者的体液或病毒污染的物品（如衣服和被褥）而传播 。 主要临床症状为发热 、 剧烈头痛 、 淋巴结肿大 、 背痛 、 肌肉痛（肌肉疼痛）以及倍感无力（精神不振） 。 因此快速检测猴痘病毒具有重要的意义 。 本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的专门检测猴痘病毒的试剂盒 ， 它具有下列特点：

1.    即开即用 ，用户只需要提供样品DNA模板。

2.    引物和探针经过优化 ，分析灵敏性高 ，可以达到100拷贝/反应。

3.    提供阳性对照 ，便于区分假阴性样品。

4.   特异性高 ， 引物是根据猴痘病毒DNA高度保守区设计 ，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。

5.    既可用于定性检测 ， 又可用于定量检测 。 用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6.    本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7.    本产品只能用于科研。

规格及成分

试剂盒组成

成分

规格

包装

2 × Probe qPCR MasterMix

0.5 mL

0.5 mL

荧光PCR专用模板稀释液

1 mL

1.5 mL

超纯水

1 mL

1.5 mL

猴痘病毒qPCR引物-探针干粉

50次

0.5 mL

猴痘病毒qPCR阳性对照(1E 7拷贝/μL)

50μL

0.5 mL

使用手册

1份

1份

注意 ： 引物-探针干粉在使用前需要短暂离心 ，然后在离心管中加入165uL的超纯水充分混匀后再使用 ，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存

低温运输 ， -20℃保存 ，保存期限为24个月。

自备试剂

样品DNA

使用方法

一、稀释标准曲线样品（以1E 1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例） 。

由于标准品浓度非常高 ， 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行 ， 千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分 。 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原 ，本产品不提供活体样品做阳性对照 ，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管 ，分别为6 ， 5 ，4 ， 3 ，2 ， 1。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液 ，最好用带芯枪头 ， 下同。

3. 在6号管中加入5μL 1 E7拷贝/μL  的阳性对照(试剂盒提供) ，充分震荡1分钟 ，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品 。放冰上待用。

4.   换枪头 ， 在5号管中加入5μL 1 E6拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得) ， 充分震荡1分钟 ，得1E 5拷贝/μL的标准曲线样品 。放冰上待用。

5. 换枪头 ， 在4号管中加入5μL 1 E 5拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得) ， 充分震荡1分钟 ，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品 。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品 。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7. 如 果 有 N 个 样 品  ， 最 好 设 置 N+2 个 提 取  ， 多 出 的 一 个 是 PC （样 品 制 备 阳 性 对照）  ， 一个是NC（样品制备阴性对照）  。 可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样  ， 以此作为PC 。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品的DNA  ，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容 。

也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、 Probe qPCR反应（20μL体系 ，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重复 ， 则标记N+9个PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2个样品  ，  1个用于PCR阴性对照 （用水做模板）  ， 6个用于标准曲线 。 如果做定性分析并且只做1次重复 ， 则标记N+4个PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2个样品  ，  1个用于PCR阴性对照 （用水做模板）  ，  1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）  。 下面只以定量分析为例描述