呼吸道合胞病毒 B 型探针法 qRT-PCR 试剂盒（不含内参） Respiratory Syncytial Virus-B Probe qRT-PCR Kit

产品及特点

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus ； RSV) ， 其病毒颗粒通常呈球形 ，直径约120 ~300 nm ， 基因组约15.2 k nt ，是一种属于副黏病毒科肺病毒属的有包膜负链单股RNA病毒 ， 主要引起婴幼儿的下呼吸道感染 。 RSV可分为A型和B型两大抗原亚群 ，其中B型在遗传上具有较大的变异性 。 呼吸道合胞病毒B型（Respiratory Syncytial Virus-B ， RSV-B） ，在全球范围内广泛传播 ，尤其在冬季和早春季节高发 。 它主要通过飞沫传播 ， 并可在污染的物体表面存活一段时间 。 感染RSV B型后 ， 婴幼儿可能出现细支气管炎 、肺炎 、 咳嗽 、 喘息和发热等症状 。 对于免疫低下者和老年人 ， 感染可能导致更严重的呼吸道疾病 ，严重危害人类健康 ， 因此快速检测呼吸道合胞病毒B型具有重要的意义 。 为此 ， 本公司以探针法qRT-PCR技术为基础开发了呼吸道合胞病毒B型的检测试剂盒 ， 它具有下列特点：

1.   即开即用 ，用户只需要提供样品 RNA 模板。

2.    引物和探针经过优化 ，分析灵敏性高 ，可以达到 100 拷贝/反应。

3.   提供阳性对照 ，便于区分假阴性样品。

4.   特异性高  ， 引物是根据呼吸道合胞病毒B型RNA高度保守区设计 ，不会跟其它RNA发生交叉反应。

5.    既用于定性检测 ，又用于定量检测 。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6.   本产品足够50次20μL 体系的探针法荧光定量 qRT-PCR 反应。

7.   本产品只能用于科研。

规格及成分

试剂盒组成

注意： 引物-探针干粉在使用前需要短暂离心 ，然后在离心管中加入165uL的超纯水充分混匀后再使用 ，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存

低温运输 ， -20℃保存 ，保存期限为12个月。

自备试剂

样品RNA ，超纯水 ，核酸纯化试剂盒

使用方法

一、稀释标准曲线样品（以1E 1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例） 。

由于标准品浓度非常高 ， 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行 ， 千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分 。 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原 ，本产品不提供活体样品做阳性对照 ，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管 ，分别为6 ， 5 ，4 ， 3 ，2 ， 1。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液 ，最好用带芯枪头 ， 下同。

3. 在6号管中加入5 μL 1 E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供) ， 充分震荡1分钟 ， 得1E6拷贝/μL的标准曲线样品 。放冰上待用。

4. 换枪头 ，在5号管中加入5 μL 1 E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得) ， 充分震荡1分钟 ，得1E 5拷贝/μL的标准曲线样品 。放冰上待用。

5. 换枪头 ，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得) ，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品 。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7. 如 果 有 N 个 样 品  ， 最 好 设 置 N+2 个 提 取  ， 多 出 的 一 个 是 PC （样 品 制 备 阳 性 对照）  ， 一个是NC（样品制备阴性对照）  。 可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样 ， 以此作为PC 。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品的RNA  ， 本试剂盒跟市场上大多数样品RNA提取试剂盒兼容。

也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、 Probe qRT-PCR反应（20μL体系 ，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重复 ， 则标记N+9个RT-PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2 个样品 ， 1个用于RT-PCR阴性对照 （用水做模板） ， 6个用于标准曲线 。 如果做定性分析并且只做1次重复 ， 则标记N+4个RT-PCR管 ， 其中N+2个用于上步得到的N+2 个样品 ， 1个用于RT-PCR阴性对照 （用水做模板） ， 1个用于RT-PCR阳性对照 （直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板） 。 下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.  在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复 。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照 ， 并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加） :